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第二节 出凝血检验

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    出血时间(bleeding time BT)

    BT指皮肤受特定条件的外伤后,出血自行停止所需要的时间。该过程反映了皮肤毛细血管与血小板的相互关系,包括血小板的黏附、活化、释放和聚集。

    Ivy法:2~7min。

    测定器法:2.3~9.5 min。

    1.BT缩短见于血栓前状态或血栓栓塞性疾病,如妊娠高血压综合征、心肌梗死、脑血管疾病、心绞痛、糖尿病伴血管病变、成人型呼吸窘迫综合征以及弥散性血管内凝血(DIC)的高凝血期等。

    2.出血时间延长通常表示止血初期的障碍。见于:

    (1)血小板质与量异常:血小板减少性紫癜、血小板增多症、血小板无力症、再生障碍性贫血、急性白血病、恶性贫血等。

    (2)微血管结构或功能异常:如遗传性毛细血管扩张症、血管性假血友病、坏血病等。

    (3)其他:先天性纤维蛋白缺乏症、凝血酶原缺乏症、纤维蛋白溶解活性增高、新生儿出血病。抗凝血药物(如双香豆素、肝素)服用过量、慢性尿毒症、甲状腺功能低下、肝脏疾患、严重阻塞性黄疸、维生素K吸收减少、严重贫血等。

    3.BT正常:并不能完全除外初期止血缺陷。因此如果有出血家族史,而且又无凝血因子异常,应进一步进行有关实验检查。

    1.应消除患者的紧张情绪,避免血小板、凝血因子的激活。

    2.在操作过程中要避开水肿、冻伤或有瘢痕的部位刺血。

    3. Ivy法要避开浅表静脉处。

    4.采血部位应保暖,血液应自动流出。

    5.试验前1w内不能服用抗血小板药物,如阿司匹林等,以免影响结果。

    6.切口方向、切口深度、环境温度、静脉血压、年龄和性别等因素均会影响出血时间的测定结果。

    血浆凝血酶原时间(prothrombin time,PT)

    PT是反映外源性凝血系统最常用的筛选试验。

    通常1成人:11~15s,新生儿延长2~3s。待测者的测定值较正常对照值延长超过3s有临床意义。2凝血酶原时间比值(PTR)为0.85~1.15s。3INR:口服抗凝剂治疗不同的疾病,需不同的INR。

    1.延长见于

    (1)先天性凝血因子异常,如凝血因子2、V、X缺乏症和低(无)纤维蛋白原血症:

    (2)获得性凝血因子异常,见于严重肝病、DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏症、血循环中有抗凝物质等。

    (3)缩短见于:先天性因子V增多症、口服避孕药、高凝状态和血栓性疾病等。

    (4)用于口服抗凝剂的监控:临床上,常将INR为2~4h作为口服抗凝剂治疗时的适用范围。口服抗凝剂达到有效剂量时的INR值:预防深静脉血栓形成1.5~2.5,治疗静脉血栓形成、肺栓 塞、心脏瓣膜病为2.0~3.0,治疗动脉血栓栓塞、心脏机械瓣膜置换、复发性系统性栓塞症为3.0~4.5。

    1.溶血、脂血对结果有影响。

    2.如果不能立即测试,应尽快分离血浆,盛血浆的容器加塞,防止pH值改变。

    3.采血后宜在1h内完成,置4℃冰箱保存不应超过4h,-20℃下可放置2w,-70℃下可放置6m。

    1.尽量一针见血,不要淤血和气泡,采血后立即与抗凝剂混合,尽快送往实验室。

    2.用对凝血因子无激活作用的塑料制品或经硅化的玻璃器皿收集标本。

    3.抗凝剂使用枸橼酸钠,血液与抗凝剂的比例严格按9:1混合均匀。

    4.止血带不应扎得太紧,并强调采血顺利,以防激活凝血机制。

    活化部分凝血活酶时间测定(activated parlial throT)

    APTT是内源性凝血较敏感和常用的筛选试验。

    26~36s,使用不同的APTT试剂有差别。待测者的测定值较正常对照值延长超过lOs有临床意义。

    目前所用的大多数APTT测定方法,凡当血浆凝血因子低于正常水平的15%~30%即可出现异常。

    1.APTT延长:APTT结果超过正常对照lOs以上即为延长。

    APTT是内源性凝血因子缺乏最可靠的筛选试验,主要用于发现轻 型的血友病。虽可检出凝血因子8:C水平低于25%甲型血友病,但对于亚临床型血友病(凝血因子8>25%)和血友病携带者敏感性欠佳。结果延长也见于凝血因子Ⅺ(血友病乙)、Ⅻ和7缺乏症;血中抗凝血物质如凝血因子抑制物或肝素水平增高时,当凝血酶原、纤维蛋白原及因子V、X缺乏时也可延长,但敏感性略差;其他还见于肝病、DIC、大量输入库存血等。

    2.APTT缩短:见于DIC,血栓前状态及血栓性疾病。

    3.肝素治疗监护:APTT是目前广泛应用的实验室监护指标。

    此时要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系,否则不宜使用。一般在肝素治疗期间,APTT维持在正常对照的1.5~3.0倍为宜。

    1.分离血浆时,离心速度和时间要够,务必除去血小板,特别是用于肝素治疗监测时,因为残留血小板中的PF4可影响肝素的效应,并且此时最好用塑料管收集血液,以免玻璃管引起血小板释放PF4。

    2.如果不能立即测试,应尽快分离血浆,盛血浆的容器加塞,防止pH值改变。

    1.尽量一针见血,不要淤血和气泡,采血后立即与抗凝剂混合,尽快送往实验室。

    2.用对凝血因子无激活作用的塑料制品或经硅化的玻璃器皿收集标本。

    3.抗凝剂使用枸橼酸钠,血液与抗凝剂的比例严格按9:1混合均匀。

    4.止血带不应扎得太紧,并强调采血顺利,以防激活凝血机制。

    凝血酶时间(thrombin time,TT)

    TT测定主要反应凝血共同途径纤维蛋白原转变为纤维蛋白的过程中,是否存在异常的抗凝现象。

    16~_18s。

    1.凝血酶时间延长包括以下几种情况:

    (1)低(无)纤维蛋白原血症,纤维蛋白原浓度通常为0.9g/L或更低。

    (2)血中存在肝素或类似肝素的抗凝物质,如肝素治疗、SLE、肝病、肾病等。TT对肝素、水蛭素非常敏感。

    (3)在纤溶状态下,纤维蛋白原的功能降低。 2.异常纤维蛋白血症和巨球蛋白血症,有造成TT时间缩短的可能。

    3.TT测定不能区分继发性纤溶(如DIC)和原发性纤溶症。

    组织液混入血标本、标本在4℃环境中放置过久会缩短凝血酶时间。

    1.尽量一针见血,不要淤血和气泡,采血后立即与抗凝剂混合,尽快送往实验室。

    2.用对凝血因子无激活作用的塑料制品或经硅化的玻璃器皿收集标本。

    3.抗凝剂使用枸橼酸钠,血液与抗凝剂的比例严格按9:1混合均匀。

    4.止血带不应扎得太紧,并强调采血顺利,以防激活凝血机制。

    血浆纤维蛋白原

    (plasma fibrinogen, FIB)

    1成人:2~4g/L。2新生儿:1.25~3 g/L。

    1.纤维蛋白原增加:见于月经期和妊娠期、糖尿病、动脉硬化症、大叶肺炎、支气管肿瘤、肾病综合征、淀粉样变性、尿毒症、亚急性细菌性心内膜炎、心包炎、心肌梗死、血栓性静脉炎等。

    2.纤维蛋白原减少:见于先天性纤维蛋白原缺乏症、异常纤维蛋白原血症、新生儿、早产儿、肝损伤(如氯仿、磷、急性黄色肝萎缩、微生物毒素中毒、肝硬化)、恶性肿瘤、严重结核病、烧伤、纤维蛋白原溶解活性增高等。

    3.溶栓治疗的监测:用于溶栓治疗(如用UK、t-PA)、蛇毒治疗(如用抗栓酶、去纤酶)的监测。

    1.目前检测FIB用得最多的方法是Clauss法。虽然这种方法敏感且快速,便于操作,但对凝血酶试剂的要求要高(不能长时间保存于玻璃器皿中),高红细胞比容时抗凝剂会相对不足,使用肝素时血浆浓度不能大于10U/ml。

    2.血中存在副蛋白和纤维降解产物(FDP)等都可以影响检测值,尤其是当FIB<1.5g/L时,应与血清FDP检测同时做。

    3.出于Clauss法敏感性的限制,当FIB<0.75g/L时,误差较 大.应与APIT、PT、TT等结果一同分析。

    4.Clauss法检测的FIB需要结构正常,并有一定含量,因此,低无纤维蛋白原血症和异常纤维蛋白原血症时,应考虑改用酶联免疫吸附测定(EIISA)和放射免疫测定(RIA)等免疫检测手段。

    1.尽量一针见血,不要淤血和气泡,采血后立即与抗凝剂混 合,尽快送往实验室。

    2.用对凝血因子无激活作用的塑料制品或经硅化的玻璃器皿 收集标本。

    3.抗凝剂使用枸橼酸钠,血液与抗凝剂的比例严格按9:1混合均匀。

    4.止血带不应扎得太紧,并强调采血顺利,以防激活凝血机制。

    5.采完血后应拔掉针头,沿管壁将血液缓缓注入试管,要避免产生气泡,因为泡沫可以使FIB变性。

    血浆凝血因子8筛选试验

    (plas)

    在24h内纤维蛋白凝块不溶解(定性法)。

    试验中使用的氯化钙必须新鲜配制,这是防止出现假阴性的关键。

    纤维蛋白凝块在24h内,尤其在2h内完全溶解,表示凝血因子8有先天或获得性严重缺乏。1先天性减少:见于先天性凝血因子X缺乏症、先天性凝血因子缺乏症基因携带者、先天性B亚单位缺乏症。2后天性减少:见于产生凝血因子8抑制物、DIC、肝脏疾病。

    血浆血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)

    ELISA法:500~2 000U/L

    1.血浆血管性血友病因子减低见于:

    (1)先天性疾病:血管性血友病,为常染色体遗传性出血性疾病,VWF质或量异常。

    (2)获得性疾病:1产生抗vWF抗体,见于自身免疫性疾病、 恶性肿瘤、淋巴增殖性疾病。2vWF结构异常,见于骨髓增殖异常综合征、溶血性尿毒综合征。

    2.血浆血管性血友病因子增高见于:

    (1)血管内皮损伤,如缺血性心脑血管病、周围血管病。

    (2)高凝状态疾病,如肾病综合征、妊娠高血压、尿毒症等。

    (3)其他如大手术后、糖尿病、高脂血症、DIC等。还可见于剧烈运动后、高原反应等应激状态时。

    1.对vWF含量过高的标本,应再稀释后测定。

    2.肿瘤生长时产生的活性物质对内皮细胞的刺激可造成vWF在血中的量和结构改变,更会影响免疫分析测定的结果。

    1.尽量一针见血,不要淤血和气泡,采血后立即与抗凝剂混合,尽快送往实验室。

    2.用对凝血因子无激活作用的塑料制品或经硅化的玻璃器皿收集标本。

    3.枸橼酸钠抗凝剂不能完全抑制血小板活化,应选用抗凝剂+抗聚剂的抗凝剂,通常选用cTAD液。

    血浆D-二聚体(plasma D-dimer,DD)

    定性:阴性(凝集法)

    定量:<0.5g/L(ELISA法、LAT法、免疫渗透胶体金法)

    1.待检血浆用枸橼酸钠、EDTA和肝素等抗凝均可,但抗凝剂量不应超过血总体积的lO%。

    2。待检血浆在室温保存8h或4℃保存4d,D-二聚体含量基本不变,若需长期保存,可置-20℃保存,临检时置37℃水浴中快速复溶。

    1.D-二聚体反映高凝状态以后的纤溶,故可以鉴别原发和继发纤溶亢进。D-二聚体在原发纤溶症时正常,继发性纤溶亢进时则显著增高。见于DIC继发纤溶亢进、深静脉血栓形成、肺栓塞、先兆子痫、冠心病、慢性肾病等。

    2.当D-二聚体<0.5g/L时,血栓形成的可能性较小,但如果临床上已有明显的血栓形成所致症状与体征时,D-二聚体仍<0.5g/L时,应考虑患者有无纤溶活性低下的可能。

    3.随年龄增长,D-二聚体有增高的趋势。

    4.重症肝炎、肝硬化和慢性活动性肝炎时,D-二聚体也会升高,且与疾病的严重程度和预后有关。